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作者：

周丽红，周丽红

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摘要：

    脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)是我国重要的经济甲壳动物,了解其内分泌调控及性别调控机制在理论和实践上具有重要的指导意义。甲壳动物内分泌调控是由多种激素协同作用,共同调控其蜕皮、生长、发育等生理过程。甲壳动物的蜕皮和生长是密切相关的,甲壳动物只有通过不断蜕皮才能完成其生长和发育过程。对甲壳动物性别分化和性别决定机制的研究是实现甲壳动物性别控制的基础,一直是国际同行所关注的热点问题。本论文利用脊尾白虾为研究对象,鉴定了与蜕皮或性别发育相关的几个重要功能基因,并对其功能进行了初步分析,以期为阐明甲壳动物的蜕皮调控和性别发育机制提供重要基础。主要进展简述如下:    甲壳动物的蜕皮是与其生长、变态和繁殖密切相关的重要生理过程。前期的研究表明蜕皮过程是由20-羟基蜕皮酮(20E)及其上游的激素、多肽和环境因子共同调控的,然而对于20E调控的下游基因以及其在蜕皮中的功能仍不清楚。蜕壳激素基因(eclosion hormone, EH),又称为羽化激素,最早是从飞蛾中分离得到的,随后在其他昆虫如烟草天蛾(Manduca sexta)、家蚕(Bombyx mori)、果蝇(Drosophila melanogaster)中都有报道。EH是由昆虫的腹神经细胞合成和分泌的一类神经肽,在昆虫蜕皮中起着重要的作用,至于EH在甲壳动物蜕皮中的作用了解得很少。本论文从脊尾白虾中获得了与昆虫的EH编码基因具有一定相似性的序列(命名为EcEH),其开放阅读框(ORF)为273 bp,可编码90个氨基酸；氨基酸序列包括一段疏水的信号肽,6个保守的半胱氨酸残基,具有保守的eclosion结构域。组织表达分析结果表明,EcEH 转录本主要在鳃、表皮及眼柄中表达。EcEH在脊尾白虾不同的蜕皮时期,其转录表达发生明显的变化,在蜕皮前期(late premolt)表达量最高,而在其它蜕皮时期,其表达量维持在较低水平,提示其可能与蜕皮相关。利用RNAi干扰技术和外源20-羟基蜕皮酮(20E)激素注射的方法进一步研究了EH在脊尾白虾蜕皮中的功能, 结果表明注射EcEH的双链RNA会导致蜕皮过程明显延迟,注射外源的20E可以明显加快蜕皮进程。以上研究结果说明EcEH与脊尾白虾的蜕皮密切相关。    胰岛素样促雄性腺激素(Insulin-like androgenic gland hormone, IAG)由甲壳动物雄性个体所独有的促雄性腺(Angrogenic gland, AG)分泌,在雄性甲壳动物的性别分化、雄性性征维持和精子发生中发挥着关键作用。IAG基因在沼虾、对虾、蟹类中均有报道, 但是对其功能的研究相对较少。本论文从脊尾白虾中克隆了IAG基因(EcIAG),并对其功能进行了分析。EcIAG基因的ORF全长531bp,可编码176个氨基酸；包括一段疏水的信号肽,6个保守的半胱氨酸残基,具有保守结构域(insulin-like IPRO16179)。EcIAG主要在雄性个体的促雄性腺(AG)及精巢(Te)中表达。原位杂交分析表明:EcIAG的转录本主要定位在促雄性腺细胞。对不同胚胎和幼体发育时期的转录表达分析结果表明,EcIAG在原肠期和仔虾P2期有着较高表达。为了解眼柄内分泌中心是否对EcIAG的表达具有调控作用,我们研究眼柄摘除对其表达的影响。结果表明:眼柄摘除后EcIAG的转录表达明显提高,说明眼柄中存在调控IAG表达的激素。原位杂交的相关研究为理解甲壳动物的性别分化调控通路提供了一定基础。    Sox9(SRY-box9)基因是一类与动物性别决定基因SRY具有高度序列相似性的转录因子。基于Sox9在哺乳动物等物种中参与性别调控过程,本研究尝试探讨EcSox9在促雄性腺中的表达分布情况及其与EcIAG之间的调控关系。本研究从脊尾白虾中克隆获得Sox9基因,其ORF全长672bp,编码243个氨基酸；推导的氨基酸序列具有保守的HMG BOX结构域。EcSox9 转录本在各组织中广泛存在,但在鳃及肝胰腺中表达量最高。EcSox9的表达随着胚胎和幼体发育时期的推移而呈现表达增加的趋势。EcSox9在摘除眼柄的脊尾白虾促雄性腺中表达量增加,表明眼柄中可能存在内分泌调控因子对EcSox9基因的表达具有调控作用。利用RNAi技术研究了EcSox9和EcIAG基因之间的关系,结果表明:注射EcSox9的双链RNA(dsSox9)时,EcIAG的表达量显著降低,表明EcSox9可能对EcIAG的表达存在正调控的关系；而在注射EcIAG的双链dsIAG时,EcSox9的表达量却显著升高,表明EcIAG的表达水平对EcSox9的表达存在反馈调控作用。相关研究结果为阐明Sox9在甲壳动物性别决定中的作用提供了重要资料。

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年份：

2016